Αλυσιδωτή Αντίδραση Πολυμεράσης PCR

ΑΛΥΣΙΔΩΤΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΗ
ΠΟΛΥΜΕΡΑΣΗΣ (POLYMERASE
CHAIN REACTION, PCR)

ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΗ ΠΡΑΚΤΙΚΗ ΙI

ΒΑΣΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης αποτελεί το δεύτερο βασικό βήμα για την μετέπειτα μελέτη του DNA και την γονοτύπηση.

Το πρωτόκολλο της παρούσας εργαστηριακής άσκησης είναι απόλυτα προσαρμοσμένο για την πραγματοποίηση του από μαθητές και στο πλαίσιο του σχολικού περιβάλλοντος.

Όλα τα υλικά που χρησιμοποιούνται κατά τη διάρκεια της άσκησης είναι πλήρως ασφαλή για χρήση αυτών από μαθητές και στο πλαίσιο του σχολικού περιβάλλοντος.

Μέση διάρκεια της εργαστηριακής άσκησης «Αλυσιδωτή Αντίδραση Πολυμεράσης, PCR» είναι 1h και 30min.

Τονίζεται η σημασία της λεπτομέρειας κατά τη μετάγγιση των μικροποσοτήτων για μία επιτυχημένη αντίδραση PCR ενισχυμένου σήματος και αποφυγής επιμόλυνσης με ενίσχυση ξένου DNA.

Τονίζεται η σημασία του αρνητικού μάρτυρα και σε τι διαφέρει από ένα προς ανάλυση δείγμα ενδιαφέροντος.

Προετοιμασία εργαστηριακής άσκησης

Εργαστηριακή πορεία

Προσθήκη όλων των αντιδραστηρίων του πρωτοκόλλου PCR με τη σειρά που αναγράφονται
Προετοιμασία δύο δειγμάτων (*δείγμα XX, αρνητικός μάρτυρας XX)
Καλή ανάμιξη των αντιδραστηρίων κατά την προετοιμασία του εκάστοτε δείγματος
Φυγοκέντρηση δευτερολέπτων
Τοποθέτηση του δείγματος 1 και του αρνητικού μάρτυρα 1 στην πλάκα της συσκευής PCR
Εφαρμογή του προτεινόμενου θερμοκρασιακού πρωτοκόλλου
Αναμονή μέχρι την προγραμματισμένη λήξη της λειτουργίας του μηχανήματος PCR

*Όπου XX ο μαθητής αναγράφει τα αρχικά του ονόματός του

Ερωτήσεις

Γιατί είναι απαραίτητη η αναγραφή των ονομάτων σε αυτό το βήμα;
Ποιος ο ρόλος του κάθε αντιδραστηρίου;
Αν προσθέσω λίγο παραπάνω από τον κάθε εκκινητή ποια μπορεί να είναι τα πιθανά αποτελέσματα της αντίδρασης;
Ποιος ο ρόλος του αρνητικού μάρτυρα;